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                                            集團要聞

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                                            Ps-2,E3,RZ-1和751四種致病菌對黛龍素等三種消毒劑的 敏感性研究
                                            李怡 楊先樂 張良 胡鯤
                                            上海水產大學農業部漁業動植物病原庫 200090
                                            摘 要 用黛龍素對養殖魚類暴發性疾病的致病菌嗜水氣單胞菌(AH-2),鰻鱺的細菌性疾病的致病菌鰻弧菌(E3),對蝦細菌性疾病的溶藻弧菌(RZ-01)和鰻愛德華氏病的遲鈍愛德華氏菌(751)進行體外抗菌實驗,并用二溴海因,碘伏作為對照,測定其最小抑菌濃度(MIC)。結果表明:黛龍素對這四種菌的MIC分別為2.5μg/ml,31.2/ml和1.25μg/ml,0.039μg/ml,碘伏對這四種菌的MIC均大于10μg/ml,二溴海因對這四種菌的MIC分別為10μg/ml,62.5μg/ml,>10μg/ml,10μg/ml。
                                            關鍵詞 黛龍素,嗜水氣單胞菌,遲鈍愛德華氏菌,溶藻弧菌,鰻弧菌,最小抑菌濃度

                                                    黛龍素的化學名稱是聚六亞甲基胍(PHMG),是一種環保型多用途新型聚合物,強力,殺菌譜廣,長效,可降解,對環境沒有污染。且它具有防霉、防腐等特點,但至今沒有用于水產養殖消毒劑的報道。黛龍素在水產養殖中的作用是一個關鍵問題。鑒此,本文對幾種常見致病菌對黛龍素的敏感性進行了研究,以期為黛龍素在水產養殖中的應用提供依據以及它作為消毒劑使用中的方法與劑量對黛龍素的研究與開發非常重要。
                                                    本文用黛龍素對養殖魚類暴發性疾病的致病菌嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophlia)(AH-2),鰻鱺的細菌性疾病的致病菌鰻弧菌(Vibrioanguilla)(E3),對蝦細菌性疾病的溶藻弧菌(Vibrioalginolaticus)(RZ-01)和鰻愛德華氏病的遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)(751)進行體外抗菌實驗,并用二溴海因,碘伏作為對照,測定其最小抑菌濃度(MIC)。

                                            1.材料與方法
                                            1.1實驗材料
                                            1.1.1實驗菌株:AH-2、E3、RZ-01和751均為中華人民共和國農業部動植物病原庫保存的菌種。將AH-2、E3、RZ-01和751分別接種于普通營養瓊脂斜面培養基復蘇,再將斜面菌種轉接于10mL的營養肉湯液體培養基中,在28℃培養18~24h備用。
                                            1.1.2黛龍素及其母液的配制:黛龍素由上海黛龍生物工程科技有限公司提供,含黛龍素25%。將其配制為含黛龍素5000μg/ml、100μg/ml的母液。
                                            1.1.3碘伏母液的配制:碘伏及其母液的配制:碘伏由東海水產研究所提供,含碘 95 %。將其配制為含碘伏5000μg/ml 、100μg/ml的母液。放置4℃備用。
                                            1.1.4二溴海因母液的配制:二溴海因由西安漢寶公司生產,白色粉劑,將其配制為含二溴海因5000μg/ml、100μg/ml的母液。放置4℃備用.測定其有效氯含量為36.9%。
                                            1.2實驗方法
                                            1.1.1最小抑菌濃度(MIC)的確定:分別以無菌操作法將黛龍素、碘伏、二溴海因加入肉湯培養基中,配制以下濃度梯度的藥液:10、 5、2.5、1.25、0.625、 0.3125、0.156、0.078、0.039、0.020、0.01、0.005μg/ml。每管體積為10ml,均接入菌液0.1ml。分別設立菌液對照與藥液對照。在含10 ml不加藥液的另一試管肉湯培養基中加入細菌懸液0.1ml,作為菌液對照組。再取另一管10 ml液體培養基,加待測消毒劑0.1ml,不加菌液,作為消毒劑對照組。置28℃培養箱培養24h后觀察。結果判定標準為:以溶液澄明無菌生長者為陰性,其中溶液稀釋度最大的這管待測消毒劑濃度為最小抑菌濃度。
                                            1.2.2  E3最小抑菌濃度(MIC)的確定:為了準確地測定E3的最小抑菌濃度。我們又分別配制了以下濃度梯度的藥液:500、125、62.5、31.2、15.6、7.8、 3.9、 1.95、 0.98、 0.49、 0.245、 0.123μg/ml。按照1.2.1的方法測定這三種消毒劑對E3的MIC。

                                             

                                            2.結果
                                            2.1最小抑菌濃度:結果表明黛龍素對這四種致病菌均有較好的抑菌作用。黛龍素對AH-2、E3、RZ-01和751的MIC分別為2.5μg/ml,31.2/ml和1.25μg/ml,0.039μg/ml。碘伏對這四種病原菌的MIC均大于10μg/ml,二溴海因對AH-2、E3、RZ-01和751的MIC分別為10μg/ml,62.5μg/ml,>10μg/ml,10μg/ml(表1、2)。
                                            表1:黛龍素、碘伏、二溴海因對AH-2、E3、RZ-01和751的最小抑菌濃度(MIC)

                                            菌株

                                            消毒劑

                                            藥物濃度(μg/ml)

                                             

                                            MIC

                                            10

                                            5

                                            2.5

                                            1.25

                                            0.625

                                            0.312

                                            0.156

                                            0.078

                                            0.039

                                            0.020

                                            0.010

                                            0.005

                                            μg/ml

                                            AH-2

                                            黛龍素

                                            -*

                                            -

                                            -

                                            +

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                                            2.5

                                            E3

                                            +

                                            +

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                                            >10

                                            RZ-01

                                            -

                                            -

                                            -

                                            -

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                                            +

                                            1.25

                                            751

                                            -

                                            -

                                            -

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                                            -

                                            -

                                            -

                                            -

                                            -

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                                            +

                                            +

                                            0.039

                                            AH-2

                                            碘伏

                                            +

                                            +

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                                            +

                                            +

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                                            >10

                                            E3

                                            +

                                            +

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                                            RZ-01

                                            +

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                                            >10

                                            751

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            >10

                                            AH-2

                                            二溴
                                            海因

                                            -

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            10

                                            E3

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            >10

                                            RZ-01

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            >10

                                            751

                                            -

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            10

                                            *  “-”菌株不生長,“+”菌株生長。以下同。

                                            表2:黛龍素、碘伏、二溴海因對E3的最小抑菌濃度(MIC)的補充試驗

                                             


                                            菌株

                                            消毒劑

                                            藥物濃度(μg/ml)

                                            MIC

                                            500

                                            125

                                            62.5

                                            31.2

                                            15.6

                                            7.8

                                            3.9

                                            1.95

                                            0.98.

                                            0.49

                                            0.245

                                            0.123

                                            μg/ml

                                            E3

                                             

                                            黛龍素

                                            -

                                            -

                                            -

                                            -

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            31.2

                                             

                                            碘伏

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            >500

                                            二溴
                                            海因

                                            -

                                            -

                                            -

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            +

                                            62.5


                                            3.討論
                                            結果表明,黛龍素對遲鈍愛德華氏菌(751)、嗜水氣單胞菌(AH-2)、溶藻弧菌(RZ-01)均有很強的抑菌作用,其抑菌作用要比二溴海因和碘伏強,尤其是遲鈍愛德華氏菌,黛龍素對它的MIC僅為0.039μg/ml,而其他兩種消毒劑對這種致病菌的MIC分別為>10μg/ml和5μg/ml。與其他兩種消毒劑相比,黛龍素對這四種菌的抑菌效果是顯著的。所以在實際生產應用中,黛龍素有可能作為消毒劑使用。除了它的使用濃度較低外,它也不容易對養殖動物本身造成毒害或引起藥物殘留...
                                             
                                             

                                            QQ:3196591484 電話:13601749953

                                            地 址:上海市奉賢區泰青路4085號